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為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育?

更新時間:2021-06-07      瀏覽次數(shù):855
  在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有一定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當。
 
  1.為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育?
 
  ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機,只有*貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進程,因而需經(jīng)擴散才能到達反響的結(jié)尾。在這以后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
 
  2.溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。
 
  37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在建立ELISA方法作反響動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1~2小時,產(chǎn)品的生成可達高峰。為加快反響,可進步反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜,以構(gòu)成*多的沉淀。但因所需時刻太長,在試劑盒中一般不予選用。
 
  ELISA試劑盒 保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將試劑盒板置于水浴箱中,ELISA板底應貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,試劑盒應放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應如此。
 
  無論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時的室溫應嚴厲限制在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20~25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,試劑盒只需平置于操作臺上即可。應留意溫育的溫度和時刻應按規(guī)則力求準確。為確保這一點,一個人操作時,一次不宜多于兩塊板一起測定。
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